Generación de condrocitos humanos inmortalizados a partir de cartílago osteoartrítico y sano: una nueva herramienta para estudios de fisiopatología del cartílago
Las líneas celulares de condrocitos inmortalizados podrían ayudar en la investigación de la osteoartritis ya que, de manera similar a los condrocitos articulares primarios, muestran capacidad para regular mediadores inflamatorios en respuesta a la citoquina IL-1β.
https://online.boneandjoint.org.uk/doi/full/10.1302/2046-3758.121.BJR-2022-0207.R1
- Después de algunos pases de cultivo in vitro, los condrocitos articulares humanos primarios experimentan senescencia y pérdida de su fenotipo. La mayoría de las líneas celulares de condrocitos disponibles se han obtenido de tejidos de cartílago diferentes de las articulaciones diartrodiales, y su utilidad para la investigación de la osteoartritis (OA) es reducida. Por lo tanto, el objetivo de esta investigación fue el desarrollo de líneas celulares de condrocitos inmortalizados procedentes del cartílago articular de pacientes con y sin OA.
- Utilizando la transcriptasa inversa de telomerasa (hTERT) y el antígeno T grande SV40 (SV40LT), transducimos condrocitos articulares primarios de OA. Se evaluó la capacidad proliferativa, el grado de senescencia y la expresión del antígeno de superficie de condrocitos en condrocitos transducidos. Además, se evaluó la capacidad de los condrocitos transducidos para sintetizar un tejido similar al cartílago y para responder a la interleucina (IL)-1β.
- Resultados
- Se observó coexpresión de ambos transgenes (SV40 y hTERT) en los núcleos de los condrocitos transducidos. Las líneas celulares de condrocitos generadas mostraron una alta capacidad de proliferación y menos del 2% de células senescentes. Estas líneas celulares pudieron formar agregados 3D análogos a los generados por los condrocitos articulares primarios, pero no lograron sintetizar tejido similar al cartílago cuando se sembraron en esponjas de colágeno tipo I. Sin embargo, las líneas celulares de condrocitos generadas mantuvieron el potencial para responder a la estimulación con IL-1β.
- A través de la transducción SV40LT y hTERT, inmortalizamos con éxito los condrocitos. Estos condrocitos inmortalizados pudieron superar la senescencia in vitro, pero fueron incapaces de sintetizar tejido similar al cartílago en las condiciones experimentales. No obstante, estas líneas celulares de condrocitos podrían ser ventajosas para la investigación de la OA ya que, de manera similar a los condrocitos articulares primarios, mostraron capacidad para regular al alza los mediadores inflamatorios en respuesta a la citoquina IL-1β.
Enfoque del artículo
Los condrocitos articulares humanos primarios tienden a envejecer y perder su fenotipo cuando se cultivan in vitro.
Las líneas celulares de condrocitos disponibles que se han generado a partir de fuentes de cartílago distintas de las articulaciones sinoviales tienen un uso limitado para la investigación de la osteoartritis (OA).
Por estas razones, nuestro objetivo era generar líneas celulares de condrocitos inmortalizadas derivadas del cartílago articular de pacientes con y sin artrosis.
Mensajes clave
La transducción de condrocitos articulares con antígeno T grande SV40 y transcriptasa inversa de telomerasa les permite superar la senescencia in vitro.
Los condrocitos articulares inmortalizados regulan al alza los mediadores inflamatorios interleucina (IL)-6, IL-8 y ciclooxigenasa-2 cuando se estimulan con IL-1β de manera similar a los condrocitos articulares primarios.
Sin embargo, los condrocitos articulares inmortalizados no pudieron formar tejido similar al cartílago en las condiciones probadas.
Fortalezas y limitaciones
Las líneas celulares de condrocitos que generamos se derivan del cartílago articular, muestran altas tasas de proliferación y no tienen requisitos especiales de cultivo in vitro. Lo que es más importante, estos condrocitos inmortalizados pueden activar la inflamación en respuesta a la IL-1β.
Sin embargo, la principal limitación de este estudio es que los condrocitos inmortalizados no mostraron las capacidades anabólicas que son características de los condrocitos articulares primarios.
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/36647698/
https://online.boneandjoint.org.uk/doi/full/10.1302/2046-3758.121.BJR-2022-0207.R1
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